ГОСТ 7702.2.5-93 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы выявления и определения количества листерелл

ГОСТ 7702.2.5-93

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЯСО ПТИЦЫ, СУБПРОДУКТЫ И ПОЛУФАБРИКАТЫ ПТИЧЬИ

Методы выявления и определения количества листерелл

Издание официальное

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ

ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

Минск

Предисловие

• 1 РАЗРАБОТАН Госстандартом России

ВНЕСЕН Техническим секретариатом Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации

• 2 ПРИНЯТ Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации 21 октября 1993 г.

За принятие проголосовали:

• 3 Постановлением Комитета Российской Федерации по стандартизации, метрологии и сертификации от 02.06.94 № 160 межгосударственный стандарт ГОСТ 7702.2.5—93 введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта Российской Федерации с 01.01.95

• 4 ВЗАМЕН ГОСТ 7702.2—74 в части метода выявления листередл

• 5 ПЕРЕИЗДАНИЕ

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания на территории Российской Федерации без разрешения Госстандарта России

ГОСТ 7702.2.5-93

Группа Н19

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЯСО ПТИЦЫ, СУБПРОДУКТЫ И ПОЛУФАБРИКАТЫ ПТИЧЬИ

Методы выявления и определения количества листерелл

Poultry meat, edible offal, ready-to-cook products.

Methods Гог detection and quantity determination of Listeria

ОКСТУ 9209

Дата введения 1995—01—01

Настоящий стандарт распространяется на предназначенные для реализации и промышленной переработки:

мясо птицы в виде потрошеных, полупотрошеных и потрошеных с комплектом потрохов и шеей тушек, частей, полученных при их разделке, а также обваленное и измельченное;

субпродукты и полуфабрикаты птичьи.

Стандарт устанавливает методы выявления и определения количества листерелл.

Метод выявления основан на высеве определенного количества продукта или смывов с его поверхности и (или) их разведений в жидкую среду, инкубировании при температуре (37±1) ’С в течение (24±1) ч. в подтверждении принадлежности выросших микроорганизмов к листереллам по культурально-морфологическим свойствам, по биологическим пробам, по способности листерелл флуоресцировать при использовании люминесиируюшей сыворотки.

Метод определения количества листерелл по методу наиболее вероятного числа (НВЧ) предназначен для проб, содержащих в 1 г менее 150. но в 10 г более 3 или в 1 см³ менее 15. но в 100 см³ более 3 листерелл.

1 Методы отбора проб и подготовка к исследованиям — по ГОСТ 7702.2.0

2 Проведение исследования

2.1 Выявление листерелл по морфологическим и культуральным свойствам

• 2.1.1 Из мыши или паренхиматозных органов, костного и головного мозга готовят мазки-отпечатки. при этом из тканей вырезают стерильными ножницами кусочки размером 1.5x1 <0x1.5 см³ и прикладывают поверхностями срезов к предметному стеклу по три отпечатка на двух предметных стеклах. Мазки высушивают, фиксируют, окрашивают ио Граму по ГОСТ 36425.

Одновременно из исследуемого продукта готовят серии 10-кратных разведений по ГОСТ 26669 и проводят посев на мясо-пептонный бульон с глюкозой по ГОСТ 10444.1. После инкубирования в течение (24± 1) ч при температуре (37± 1) *С проводят пересев поверхностным методом по ГОСТ 26670 на питательный агар по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0. 2.4.2. 2.4.5. инкубируют в течение (24± 1) ч при температуре (37±1) °C. Из мелких росинчатых прозрачных колоний готовят мазки с окрашиванием по Граму.

Для дальнейших исследований отбирают не менее 5 колоний, в мазках которых обнаружены грамположительные короткие прямые овоидные палочки. иногда почти кокки, расположенные одиночно или кучками. При этом в мазках-отпечатках обнаруживаются мелкие, часто полиморфные палочки, расположенные одиночно в виде римской цифры «пять» или частокола.

• 2.2 Биохимические свойства чистых культур испытывают на образование индола, сероводорода. каталазы, на разжижение желатина.

Издание официальное

• 2.2.1 Для определения индола по стенке пробирки с суточной культурой на пептонной воде по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0. 2.3.2. инкубированной при температуре (37±1) °C. добавляют 5— 10 капель реактива Эрлиха или реактива Ковача по ГОСТ 28560. При наличии индола с реактивом Эрлиха через 5 мин в пограничном слое образуется ярко-красное кольцо, с реактивом Ковача через 10 мин после взбалтывания поверхность окрашивается в темно-красный цвет.

Листереллы индола не образуют.

• 2.2.2 Для определения сероводорода в пробирку с суточным посевом на пептонную воду помещают под пробку полоску фильтровальной бумаги по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0. 2.3.21. Культуру инкубируют в течение 24—72 ч при температуре (37± I) ’С. При выделении микроорганизмами сероводорода бумажка чернеет от образующегося сульфата свинца.

Листереллы сероводорода не образуют.

• 2.2.3 Для обнаружения каталазы в пробирку с культурой на мясо-пептонном бульоне, инкубированной в течение 12—24 ч при температуре (37±1)‘⁹С. добавляют 1 см³ раствора перекиси водорода массовой концентрации 100 г/дм³. При наличии каталазы жидкость вспенивается.

Листереллы образуют каталазу.

• 2.2.4 Для определения реакции на желатин проводят посев уколом в столбик среды по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0.2.4.35. погружая петлю с исследуемой культурой вглубь питательной среды до дна пробирки. Культуру инкубируют в течение 18—24 ч при температуре (37±1) ’С. Вместе с опытными пробирками в термостат ставят одну или две пробирки с незасеянным желатином для контроля. После инкубирования пробирки, вынутые из термостата, опускают в холодную воду или ставят в холодильник. После застудневания желатина в контрольных пробирках приступают к просмотру опытных. Там. где произошло расщепление белков желатина, отмечается его разжижение. При отсутствии разжижения желатина в опытных пробирках их вновь помещают в термостат и инкубируют в течение 48—72 ч при температуре (37±1) ’С с ежесуточным просмотром.

Листереллы желатин не разжижают.

• 2.3 Для подтверждения принадлежности культуры к листереллам проводят биопробу на белых мышах или морских свинках. Белых мышей заражают внутримышечно, подкожно или интраперитонеально в дозе 0.3—1 см³ в концентрации 10⁵—10⁶ КОЕ/см³ суточной культуры с мясо-пептонного агара, смытой стерильным физиологическим раствором. У погибших в течение 2—5 сут животных обнаруживают многочисленные очага некроза в печени, селезенке, почках и миокарде.

Морским свинкам на слизистую оболочку глаза вносят 1—2 капли инокулята. Через 18—24 ч появляется отек века, гиперемия, слезотечение, через 36—72 ч веко опухает, из глаза выделяется гнойный экссудат.

• 2.4 Метод выявления листерелл при помощи люминесцируюших антител используют, во-первых. в качестве экспресс-метода для предварительного определения листерелл с последующим подтверждением бактериологическим методом; во-вторых, для идентификации выделенной культуры. что исключает в ряде случаев определение их культуральных и биохимических свойств.

  • 2.4.1 При экспресс-методе из свежего материала (мышц, паренхиматозных органов, костного, головного мозга) готовят взвесь в физиологическом растворе в соотношении 1:5. После осаждения крупных частиц взвеси из разных участков ее поверхности готовят по три мазка.

Место нанесения материала очерчивают карандашом по стеклу с обратной стороны; подсушивают мазки на воздухе, маркируют, фиксируют этиловым ректификованным спиртом с массовой долей 96 %. При этом стекла с мазками, отделенные друг от друга, погружают в вертикальном положении на 15 мин в сосуд со спиртом. Изъятые из сосуда мазки после испарения спирта ополаскивают физиологическим фосфатно-буферным раствором по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0. 2.3.23. Допускается ополаскивать мазки физиологическим раствором или дистиллированной водой без фосфатного буфера.

На слегка подсушенный мазок наносят 1—2 капли соответствующей люминесцируюшей сыворотки, подготовленной по инструкции, прилагаемой к сывороткам.

Мазки с сывороткой помещают во влажную камеру (в чашки Петри с влажной фильтровальной бумагой на дне) и выдерживают в термостате в течение (30± 1) мин при температуре (37±1) ’С. Затем сыворотку отмывают, погружая на 20 мин мазки в кювету с физиологическим фосфатно-буферным раствором. Раствор в кювете помешивают и меняют через 10 мин. Отмытые мазки ополаскивают дистиллированной водой и высушивают на воздухе.

На поверхность мазка наносят каплю глицерина, накрывают покровным стеклом, излишек глицерина удаляют. На покровное стекло наносят нефлуоресцируюшее иммерсионное масло или его заменитель и проводят люминесцентную микроскопию.

ГОСТ 7702.2.5-93

Диагностическая оценка интенсивности люминесценции листерелл следующая:

+ + + н— яркая, сверкающая, зеленая люминесценция палочек с более интенсивным свечением по их периферии (положительная);

+ + + — отчетливо выраженная, достаточно яркая, зеленоватая люминесценция палочек с

более интенсивным свечением по их периферии (положительная);

+ + — недостаточно яркая желтовато-зеленоватая люминесценция; периферический обо

док выявляется с трудом (сомнительная);

+ — люминесценция очень слабая, морфология бактерий различается с трудом (отри

цательная);

— — люминесценция отсутствует, лишь видны тени бактерий (отрицательная).

Видовую принадлежность обнаруженных листерелл устанавливают по определенной сыворотке. которая вызывает специфическое свечение интенсивностью не менее чем на три креста.

• 2.4.2 При идентификации выделенной суточной культуры готовят не менее трех мазков на предметных стеклах. Подготовку и анализ мазков на люминесценцию проводят, как указано в 2.4.1 при экспресс-методе.

• 2.5 При определении количества листерелл по методу НВЧ высевают в мясо-пептонный бульон с глюкозой три последовательных 10-кратных разведения в 3-кратной повторности. Соотношение между количеством высеваемого материала и питательной средой 1:9. Инкубирование и анализ проводят, как указано в 2.1.1—2.2.4, 2.4.2.

3 Обработка результатов

• 3.1 Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.

• 3.2 Микроорганизмы относят к листереллам при обнаружении в мазках-отпечатках из мышц, паренхиматозных органов, костного, головного мозга грамположительных палочек, расположенных одиночно, в виде частокола, а в мазках из культуры — в виде коротких овоидных палочек, не образующих индол и сероводород, каталазоположительных, не разжижающих желатин; при биопробе на морских свинках на слизистую оболочку глаза, вызывающих опухоль глаза и выделение гнойного экссудата; при биопробе на белых мышах — гибель животных с поражением внутренних органов.

• 3.3 Принадлежность к листереллам устанавливают по определенной сыворотке, которая вызывает люминесценцию исследуемой пробы интенсивностью свечения не менее чем на три креста.

• 3.4 Результаты выявления листерелл записывают: листере;ыы обнаружены или не обнаружены, при этом указывается навеска исследуемого продукта.

• 3.5 Подсчет микроорганизмов при определении их количества проводят по ГОСТ 36425.

• 3.6 Результаты определения количества листерелл записывают, как указано в ГОСТ 7702.2.1/ ГОСТ Р 50396.1, 3.3.

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

СОДЕРЖАНИЕ

ГОСТ 21784—76 Мясо птицы (тушки кур, уток, гусей, индеек, цесарок). Технические условия

ГОСТ 25391—82 Мясо цыплят-бройлеров. Технические условия

ГОСТ 28589—90 Консервы мясные «Мясо птицы в собственном соку». Технические условия

ГОСТ 7702.0—74 Мясо птицы. Методы отбора образцов. Органолептические методы оценки качества

ГОСТ 7702.1—74 Мясо птицы. Методы химического и микроскопического анализа свежести мяса ....

ГОСТ 23481—79 Мясо птицы. Метод гистологического анализа

ГОСТ 28825-90 Мясо птицы. Приемка

ГОСТ 7702.2.0—95/ Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы отбора проб

ГОСТ Р 50396.0—92 и подготовка к микробиологическим исследованиям

ГОСТ 7702.2.1—95/ Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Метод определения коли-

ГОСТ Р 50396.1—92 честна мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов

ГОСТ 7702.2.2—93 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий ролов Escherichia. Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Serratia)

ГОСТ 7702.2.3—93 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Метод выявления сальмонелл

ГОСТ 7702.2.4—93 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы выявления и определения количества Staphylococcus aureus

ГОСТ 7702.2.5—93 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы выявления и определения количества листерелл

ГОСТ 7702.2.6—93 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы выявления и определения количества сульфигрсдуцирукипих клостридий

ГОСТ 7702.2.7—95/ Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы выявления бактерий

ГОСТ Р 50396.7—92 рода Proteus

мясо птицы

И ПРОДУКТЫ ЕГО ПЕРЕРАБОТКИ

Технические условия и методы анализа

БЗ 11-2000

Редактор В.И. Копысов Технический редактор Н.С. Гришанова Корректор Н.Л. Шнейдер Компьютерная верстка ЛА. Круговой

Изд. лиц. № 02354 от 14.07.2000. Сдано в набор 27.04.2001. Подписано в печать 04.06.2001.

Бумага офсетная. Гарнитура Таймс. Печать офсетная. Усл.псчл. 8.84. Уч.-издл. 7.60.

Зак. 991. Изд. № 2714/2. С 1235.

ИПК Издательство стандартов. 107076. Москва. Колодезный пер.. 14. Набрано в Издательстве на ПЭВМ

Калужская типография стандартов, 248021, Калуга. ул. Московская. 256 ПЛР№ 040138