ГОСТ ISO 15819-2016
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКЦИЯ КОСМЕТИЧЕСКАЯ
Обнаружение и определение содержания N-нитрозодиэтаноламина (NDELA) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (HPLC-MS-MS)
Products cosmetic. Cosmetics. Detection and determination of N-nitrosodiethanolamine (NDELA) by liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS-MS)
МКС 71.100.70
Дата введения 2025-01-01
с правом досрочного применения
Предисловие
Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН научно-производственным республиканским унитарным предприятием "Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации" (БелГИСС) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5
2 ВНЕСЕН Госстандартом Республики Беларусь
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации по результатам голосования в АИС МГС (протокол от 25 мая 2016 г. № 88-П)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Армения | АМ | ЗАО "Национальный орган по стандартизации и метрологии" Республики Армения |
Беларусь | ВY | Госстандарт Республики Беларусь |
Казахстан | KZ | Госстандарт Республики Казахстан |
Киргизия | КG | Кыргызстандарт |
Россия | RU | Росстандарт |
Таджикистан | TJ | Таджикстандарт |
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 16 января 2024 г. № 13-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 15819-2016 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2025 г. с правом досрочного применения.
5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 15819:2014* "Косметика. Аналитические методы. Нитрозамины. Обнаружение и определение N-нитрозодиэтаноламина (NDELA) в косметической продукции методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (HPLC-MS-MS)" ["Cosmetics - Analytical methods - Nitrosamines. Detection and determination of N-nitrosodiethanolamine (NDELA) in cosmetics by HPLC-MS-MS), IDT].
Международный стандарт разработан техническим комитетом по стандартизации ISO/TC 217 "Косметика" Международной организации по стандартизации (ISO).
При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА.
Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5-2001 (подраздел 3.6)
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.
В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"
Введение
Окружающая среда, продукты питания, средства личной гигиены могут выступать в качестве источников N-нитрозаминов, с которыми непосредственно взаимодействует человек. В ходе исследований было выявлено, что N-нитрозамины проявляют потенциальную канцерогенную активность в отношении некоторых видов животных, в связи с чем минимизация воздействия N-нитрозаминов на организм человека признана одной из важнейших целей сохранения здоровья людей. Среди N-нитрозаминов N-нитрозодиэтаноламин (NDELA) признан в качестве потенциального загрязнителя косметической продукции.
В связи с этим было разработано несколько аналитических методов обнаружения и определения присутствия NDELA в косметической продукции. Примерами таких методов являются метод газовой хроматографии/термоэнергетический анализ, высокоэффективная жидкостная хроматография в сочетании либо с фотолизом и колориметрическим количественным определением, либо с последующим масс-спектрометрическим определением. В последнем методе применяются новейшие технологии, обеспечивающие максимальную точность определения NDELA, позволяющие минимизировать риск искусственного образования NDELA в анализируемой продукции и провести точное количественное определение.
Данный метод включает в себя обнаружение и определение содержания N-нитрозодиэтаноламина (NDELA) в косметической продукции и ингредиентах косметической продукции при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией.
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает метод обнаружения и определения содержания N-нитрозодиэтаноламина (NDELA) в косметической продукции и сырье для ее изготовления.
Данный метод не применяется для обнаружения и/или определения содержания других нитрозаминов, а также для обнаружения и/или определения содержания NDELA в продукции, не являющейся косметической продукцией или сырьем для ее изготовления.
Если загрязнение продукции NDELA возможно посредством ингредиентов, либо образование NDELA возможно в результате смешения ингредиентов, метод может применяться для количественного определения NDELA. Вместе с тем данный метод не является стандартным для косметической продукции, поскольку область применения настоящего стандарта охватывает большое количество разнообразной косметической продукции и может потребоваться адаптация данного метода к некоторым матрицам (см. ISO 12787).
В связи с этим стандарты, устанавливающие альтернативные методы определения нитрозаминов в косметической продукции, разрабатываются отдельно. Другие методы могут быть применены при условии, что они прошли проверку на способность обнаруживать NDELA и валидированы в условиях воспроизводимости и количественного определения.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие международные стандарты [для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированных - последнее издание (включая все изменения)]:
ISO 3696:1987 Water for analytical laboratory use - Specifcation and test methods (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)
ISO 12787:2011 Cosmetics - Analytical methods - Validation criteria for analytical results using chromatographic techniques (Косметика. Аналитические методы. Критерии валидации аналитических результатов с использованием методов хроматографии)
3 Сущность метода
Экстрагируют NDELA из проб косметической продукции при помощи воды, содержащей дейтерированный d8-NDELA, применяемый в качестве внутреннего стандарта (IS). Если пробы не диспергируются в воде, извлечение выполняют посредством твердофазной экстракции (ТФЭ, см. 6.3.1) с использованием картриджа C18, либо жидкостной экстракции, используя дихлорметан в качестве растворителя (извлечение ДХМ, см. 6.3.2). Экстракты анализируют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (HPLC-MS-MS).
Идентификацию NDELA проводят при помощи молекулярного иона и двух диагностических ионов. Осуществляют количественное определение NDELA путем сравнения соотношения основных фрагментарных ионов NDELA и d8-NDELA с калибровочной кривой.
В соответствии с ISO 12787 отсутствие NDELA в пробе может быть подтверждено путем проведения дополнительного анализа. Меченый препарат с известным количеством определяемого вещества может быть приготовлен для оценки предела обнаружения NDELA в пробе.
Если наблюдается матричный эффект, оказывающий существенное воздействие на характеристики метода (чувствительность, точность и т.д.) при испытании определенной косметической продукции, калибровка может проводиться методом стандартных добавок (см. ISO 12787).
4 Реактивы
При проведении анализа, если не указано иное, должны применяться реактивы только аналитической степени чистоты и только дистиллированная вода или вода первой степени чистоты в соответствии с ISO 3696:1987. Растворители должны быть пригодны для HPLC-MS анализа.
4.1 Метанол (МеОН), пригодный для HPLC-MS анализа.
4.2 Этанол (EtOH), пригодный для HPLC-MS анализа.
4.3 Дихлорметан (ДХМ), пригодный для HPLC-MS анализа.
4.4 N-Нитрозодиэтаноламин, известной степени чистоты, превышающей 95%.
4.5 d8-N-Нитрозодиэтаноламин, известной степени чистоты, превышающей 95%.
5 Аппаратура
Используется стандартное лабораторное оборудование, а также:
5.1 Вихревой смеситель.
________________
5.3 Высокоскоростная центрифуга (максимальное ускорение 20000 g).
Примечание - Если применяется центрифуга с максимальным ускорением менее 20000 g, повышенное внимание должно быть уделено возможности засорения во время извлечения анализируемого вещества в процессе ТФЭ. При необходимости в процесс может быть включен дополнительный этап фильтрации через мембранный фильтр с размером пор 0,2 мкм.
________________
5.5 Оборудование для HPLC-MS-MS.
5.5.1 Аппаратура для жидкостной хроматографии высокого разрешения, включающая: резервуар для элюирования, насос, систему ввода пробы в сочетании с тандемной масс-спектрометрией с электрораспылением, систему обработки данных, например, компьютер.
________________
- хроматографическая колонка:
- длина: 100 мм;
- внутренний диаметр: 2,1 мм;
- размер частиц: 5 мкм;
- предколонка:
- длина: 10 мм;
- внутренний диаметр: 2,1-3,0 мм;
- размер частиц: 5 мкм.
Использование предколонки не является обязательным. Если же предколонка используется, то желательно, чтобы ее внутренний диаметр был равен внутреннему диаметру разделительной колонки. Условия хроматографирования выбирают в зависимости от марки используемой в обращенно-фазной HPLC разделительной аналитической колонки.
6 Приготовление и хранение проб
6.1 Общие положения
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Большинство N-нитрозаминов являются потенциальными канцерогенами, необходимо предпринять все возможные меры предосторожности во избежание воздействия их на человека.
Все операции, связанные с использованием N-нитрозаминов или их растворов, должны выполняться в хорошо вентилируемом вытяжном шкафу или ламинарном боксе.
Часто применяемые резиновые хирургические перчатки не обеспечивают достаточной защиты. Их необходимо снимать и выбрасывать сразу же после использования и не носить в течение длительного периода времени.
Любые растворы, содержащие N-нитрозамины, должны удаляться безопасным способом (например, помещаться в жестяные банки или ведра для опасных химических отходов).
N-нитрозодиэтаноламин должен храниться в защищенном от света месте при температуре 2°C-8°C.
Ультрафиолетовые (УФ) лучи разлагают N-нитрозамины, поэтому все растворы N-нитрозаминов (стандартные/экстракты) должны храниться таким образом, чтобы предотвратить их порчу и изменение состава.
Анализ методом HPLC-MS-MS проводят, как правило, в течение 30 мин после приготовления экстрактов проб. Если проведение испытания откладывают, следует проверить стабильность всех стандартных растворов и экстрактов.
6.2 Приготовление стандартных растворов
6.2.3 Готовят рабочие растворы (B, C, D, E и F) последовательным разбавлением исходного раствора (A). Все растворы хранят в защищенном от света месте при температуре 2°C-8°C.
Рабочие растворы | Объем исходного или рабочего раствора | Объем воды | Конечная концентрация | Период стабильности |
Рабочий раствор B | 100 мм A | 900 мм | 100,0 мкг/см | 1 сут |
Рабочий раствор C | 100 мм B | 900 мм | 10,0 мкг/см | 1 сут |
Рабочий раствор D | 100 мм C | 900 мм | 1,0 мкг/см | 1 сут |
Рабочий раствор E | 100 мм D | 900 мм | 100,0 нг/см | 1 сут |
Рабочий раствор F | 100 мм E | 900 мм | 10,0 нг/см | 1 сут |
Примечание - Пользователи данного стандарта могут регулировать фактический объем приготавливаемого раствора при условии, что будет обеспечена конечная концентрация.
6.2.4 Готовят рабочие растворы d8 (d8B и d8C), последовательно разбавляя исходный раствор (d8A). Все растворы хранят в защищенном от света месте при температуре 2°C-8°C.
Рабочие растворы d8 | Объем исходного или рабочего раствора | Объем воды | Конечная концентрация | Стабильность |
Рабочий раствор d8B | 20 мм d8A | 20 см | 1,0 мкг/см | 1 сут |
Рабочий раствор d8C | 200 мм d8B | 1800 мм | 100,0 нг/см | 1 сут |
Примечание - Пользователи данного стандарта могут регулировать фактический объем приготавливаемого раствора при условии, что будет обеспечена конечная концентрация.
Стандартные | Объем | Объем | Объем | Конечная концентрация | Период | |
растворы | рабочего раствора | рабочего раствора d8С | воды | NDELA | d8-NDELA | стабиль- ности |
Стандартный раствор 1 | 800 мм E | 200 мм | - | 80,0 нг/см | 20 нг/см | 1 сут |
Стандартный раствор 2 | 400 мм E | 200 мм | 400 мм | 40,0 нг/см | 20 нг/см | 1 сут |
Стандартный раствор 3 | 200 мм E | 200 мм | 600 мм | 20,0 нг/см | 20 нг/см | 1 сут |
Стандартный раствор 4 | 100 мм E | 200 мм | 700 мм | 10,0 нг/см | 20 нг/см | 1 сут |
Стандартный раствор 5 | 500 мм F | 200 мм | 300 мм | 5,0 нг/см | 20 нг/см | 1 сут |
Стандартный раствор 6 | 250 мм F | 200 мм | 550 мм | 2,5 нг/см | 20 нг/см | 1 сут |
Стандартный раствор 7 | 100 мм F | 200 мм | 700 мм | 1,0 нг/см | 20 нг/см | 1 сут |
Примечание 1 - В зависимости от чувствительности измерительных приборов стандартная калибровочная кривая и процедура приготовления проб могут быть адаптированы с целью сведения к минимуму возможного матричного эффекта (см. 6.3.3).
Примечание 2 - Пользователи данного стандарта могут регулировать фактический объем приготавливаемого раствора при условии, что будет обеспечена конечная концентрация.
6.3 Подготовка пробы
6.3.1 Извлечение посредством твердофазной экстракции (ТФЭ)
Примечание - В том случае, если метод HPLC-MS-MS обладает достаточной чувствительностью, может быть использована меньшая масса пробы и/или больший начальный объем воды для адаптации к определенным матрицам, а также для уменьшения возможности подавления ионизации вследствие совместного элюирования компонентов матрицы. При изменении начального объема воды необходимо, чтобы концентрация внутреннего стандарта оставалась стабильной как в стандартном растворе, так и в растворе пробы. В противном случае корректные вычисления осуществить невозможно.
При необходимости пробу готовят в трех повторностях.
6.3.2 Альтернативный способ подготовки недиспергируемых в воде проб (извлечение ДХМ)
Примечание - В том случае, если метод HPLC-MS-MS обладает достаточной чувствительностью, может быть использована меньшая масса пробы и/или больший начальный объем воды для адаптации к определенным матрицам, а также для уменьшения возможности подавления ионизации вследствие совместного элюирования компонентов матрицы. При изменении начального объема воды необходимо, чтобы концентрация внутреннего стандарта оставалась стабильной как в стандартном растворе, так и в растворе пробы. В противном случае корректные вычисления осуществить невозможно.
Центрифугируют полученную смесь при максимально возможном ускорении (предпочтительно 20000 g) в течение 5 мин. Порцию верхнего водного слоя используют для хроматографического анализа.
При необходимости фильтруют отобранный раствор, используя подходящий фильтр.
При необходимости пробу готовят в трех повторностях.
6.3.3 Дальнейшее разбавление подготовленной пробы и стандартных растворов (в случае необходимости)
Рекомендуется дополнительное разбавление экстрактов проб и (соответственно) стандартных растворов с целью сведения к минимуму потенциального воздействия совместного элюирования компонентов матрицы, которое может подавить ионизацию NDELA, ограничивая тем самым чувствительность метода. Разбавление экстрактов проб и стандартных растворов в воде рекомендуется в зависимости от чувствительности, используемой в методе HPLC-MS-MS системы.
6.3.4 Хранение проб
При необходимости пробы можно хранить в защищенном от света месте при температуре ниже 8°C.
7 Процедура
7.1 Общие положения
Анализируют содержание NDELA методом HPLC-MS-MS в полученном одним из двух способов экстракте.
7.2 Условия проведения хроматографии
Подвижная фаза: | Элюент A - раствор концентрацией 2 ммоль/дм в воде (4.8). Элюент B - раствор концентрацией 2 ммоль/дм в смеси MeOH и воды, взятых в соотношении 90:10 (по объему) (4.9). |
Интервал, мин | %A | %B |
0-1,5 | 97 | 3 |
1,5-1,6 | 97  0 | 3 100 |
1,6-4,0 | 0 | 100 |
4,0-4,1 | 0 97 | 100 3 |
4,1-6,0 | 97 | 3 |
Скорость потока: | 0,4 см /мин | |
Объем выпрыскиваемой пробы: | 20 мм | |
Температура термостата колонки: | 30°C | |
Хранение пробы: | при температуре не выше 8°C в защищенном от света месте (рекомендуется) | |
Серия впрыскивания проб: | Каждая серия состоит, по меньшей мере, из пяти точек калибровки и, по меньшей мере, из одной контрольной пробы (представляющей собой стандартный раствор) на каждые 15 экстрактов проб (для серии, состоящей менее чем из 15 экстрактов проб, необходимо включить, как минимум, одну контрольную пробу). Обычно объем серии включает не более 20 экстрактов проб. Допускается применять серии, содержащие большее количество экстрактов проб, при условии, что была подтверждена достаточная стабильность ввода пробы. |
Может потребоваться адаптация условий хроматографирования для определенных матриц при условии надлежащей верификации (см. ISO 12787).
7.3 Условия HPLC-MS-MS
Ионизация электрораспылением с образованием положительно заряженных ионов.
________________
Параметры источника
- Напряжение на распылителе (ISV) | 2800 В | |
- Потенциал декластеризации (DP) | 26 В | |
- Температура источника (TEM) | 650°C | |
- Газ-распылитель (GS1) | 70 единиц (азот) | |
- Турбо газ (GS2) | 70 единиц (азот) | |
- Газовая завеса (CUR) | 30 единиц (азот) |
Параметры анализатора
- Режим сканирования | Мониторинг множественных процессов (MRM) [мониторинг двух выбранных процессов (SRM) для NDELA и один SRM для внутреннего стандарта] | |
- Разрешение Q1 | единица | |
- Разрешение Q3 | единица | |
- Диссоциированный газ, активированный столкновениями (CAD) | 12 единиц (азот) |
Характеристические ионы 135 (M+H), 104 и 74 (фрагментарные ионы) идентифицируют присутствие NDELA в пробе.
Количественное определение NDELA осуществляется путем использования отношения интенсивностей двух основных фрагментарных ионов 104 (из NDELA) и 111 [образующегося из 143 (M+H) иона d8-NDELA].
8 Вычисление результатов
8.1 Определение значения R
Вычисляют значение R, как отношение интенсивности иона 104, образующегося вследствие фрагментации иона NDELA (M+H), и интенсивности иона 111, образующегося вследствие фрагментации иона d8-NDELA (M+H) (см. рисунок A.2 как пример), для каждого впрыскивания пробы (точка калибровки, экстракт пробы и контрольная проба).
Вычисленные значения R используют для построения калибровочной кривой и определения концентрации, с, в соответствии с 8.4.
8.2 Калибровочная кривая
Строят калибровочную кривую, нанося на график концентрацию NDELA в стандартных растворах (см. 6.2.5) относительно значения R для данных растворов.
В случае количественного определения коэффициент корреляции калибровочной кривой должен быть выше или равен 0,990 (см. рисунок A.1 как пример).
8.3 Процедура проверки достоверности и ее критерии
Относительные интенсивности двух ионов (104 и 74), обнаруженных в подготовленных пробах, выраженные в виде процента интенсивности наиболее интенсивного иона, должны соответствовать интенсивности стандартных растворов, используемых для калибровки, при соизмеримых концентрациях, измеренных в одинаковых условиях, с учетом допустимых отклонений, приведенных в таблице 1.
Достоверность результатов проверяют для каждого измерения пробы, при котором концентрация NDELA выше предела обнаружения (см. [1]).
Таблица 1 - Максимальные допустимые отклонения для относительных интенсивностей иона
Относительная интенсивность (% интенсивности основного иона) | Относительный диапазон чувствительности |
>50% | ±20% |
Свыше 20% по 50% | ±25% |
Свыше 10% по 20% | ±30% |
 10% | ±50% |
8.4 Вычисление концентраций
Концентрации NDELA проб неизвестного состава вычисляют по формуле (1):
где W - массовая доля NDELA в пробе косметической продукции, нг/г;
m - масса пробы косметической продукции, г;
Примечание - Значения V корректируют в случае использования отличающихся объемов (если это допускается, см. примечания в 6.3.1 и 6.3.2).
9 Протокол испытания
Протокол испытания должен содержать следующую информацию:
a) идентификационные данные испытуемой продукции;
b) идентификационные данные лаборатории, проводившей испытание;
c) ссылку на настоящий стандарт;
d) дату и способ отбора проб (если эта информация известна);
e) дату получения пробы лабораторией;
f) дату проведения испытания;
g) результаты испытания и единицы, в которых выражены эти результаты;
h) метод экстрагирования;
i) любые особенности, наблюдаемые при испытании;
j) все операции, не предусмотренные данным методом или рассматриваемые как необязательные, которые могли повлиять на результат;
k) идентификационные данные и подпись специалиста, ответственного за подготовку протокола.
Приложение А
(справочное)
Примеры калибровочной кривой и хроматограмм
 |
Рисунок A.1 - Пример калибровочной кривой для NDELA
 |
Рисунок A.2 - Примеры хроматограмм HPLC-MS-MS
Приложение ДА
(справочное)
Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов межгосударственным стандартам
Таблица ДА.1
Обозначение международного стандарта | Степень соответствия | Обозначение и наименование межгосударственного стандарта |
ISO 3696:1987 | IDT | ГОСТ ISO 3696-2013 "Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы контроля"* |
ISO 12787:2011 | IDT | ГОСТ ISO 12787-2016 "Продукция парфюмерно-косметическая. Аналитические методы. Критерии валидации аналитических результатов с использованием хроматографических методов" |
Примечание - В настоящей таблице использовано следующее условное обозначение степени соответствия стандартов: - IDT - идентичные стандарты. | ||
_________________
* В Российской Федерации действует ГОСТ Р 52501-2005 (ИСО 3696:1987) "Вода дистиллированная. Технические условия". "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".
Библиография
[1] | Commission Decision of 12 August 2002 implementing Council Directive 96/23/EC concerning the performance of analytical methods and the interpretation of results (Решение Комиссии от 14 августа 2002 г., реализующее Директиву Совета 96/23/ЕС относительно осуществления аналитических методов и толкования результатов) |
УДК 665.58.014:543.544.5.068.7(083.74)(476) | МКС 71.100.70 | IDT |
Ключевые слова: парфюмерно-косметическая продукция, N-нитрозамины, N-нитрозодиэтаноламин, хроматография, масс-спектроскопия | ||
