ГОСТ 20730-75
Группа Р35
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ
БУЛЬОН МЯСО-ПЕПТОННЫЙ (ДЛЯ ВЕТЕРИНАРНЫХ ЦЕЛЕЙ)
Технические условия
Nutrient media. Meat-pepton broth (for veterinary). Specifications*
______________
* Наименование стандарта. Измененная редакция, Изм. N 1.
Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 9 апреля 1975 г. N 899 срок действия установлен с 01.01.1976 г. до 01.01.1981 г.*
________________
* Ограничение срока действия снято по протоколу N 4-93 Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС N 4, 1994 год). - .
ПЕРЕИЗДАНИЕ. Август 1975 г.
ВНЕСЕНО Изменение N 1, утвержденное и введенное в действие с 01.01.90 Постановлением Госстандарта СССР от 28.06.89 N 2194
Изменение N 1 внесено изготовителем базы данных по тексту ИУС N 11, 1989 год
Настоящий стандарт распространяется на мясо-пептонный бульон, представляющий собой питательный раствор, предназначенный для выращивания микроорганизмов.
1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ
1.1. Мясопептонный бульон должен изготавливаться в соответствии с действующим технологическим регламентом из мясной воды по ГОСТ 20729-75 с добавлением 1% пептона и 0,5% хлорида натрия в разведениях 1:1, 1:2 и 1:4.
1.2. Мясо-пептонный бульон по физико-химическим, биохимическим и биологическим показателям должен соответствовать требованиям и нормам, указанным в табл.1.
Таблица 1
Наименование показателя | Норма для разведений | ||
1:1 | 1:2 | 1:4 | |
Внешний вид | Прозрачная жидкость | ||
Цвет | Желтый | Светло-желтый | |
Запах | Специфический, свежего мясного экстракта и пептона | ||
Наличие механической примеси, плесени, хлопьев и осадка | Не допускается | ||
Массовая доля общего азота, %, не менее | 0,40 | 0,25 | 0,20 |
Массовая доля азота, аминогрупп, аминокислот и низших пептидов, %, не менее | 0,09 | 0,06 | 0,04 |
Массовая доля пептонов, %, не менее | 2,7 | 1,8 | 1,4 |
Массовая доля сухого вещества, %, не менее | 3,0 | 2,0 | 1,1 |
Массовая доля белка, %, не более | 0,60 | 0,40 | 0,30 |
Массовая доля хлористого натрия, % | 0,8±0,1 | ||
Концентрация водородных ионов (рН) | 7,2-7,6 | ||
Стерильность | Посев на питательные среды не должен давать роста микрофлоры в течение 3 сут в термостате при 37-38 °С | ||
Способность поддерживать рост микробов, оптическая плотность, не менее, для | |||
Staphylococcus aureus "Лоссманов" | 0,70 | 0,30 | Рост типичный |
Escherichia coli штамм 675 | 0,75 | 0,40 | То же |
Streptococcus faecalis штамм 6783 | 0,40 | 0,25 | " |
1.1, 1.2. (Измененная редакция, Изм. N 1).
2. ПРАВИЛА ПРИЕМКИ
2.1. Мясо-пептонный бульон сдают и принимают сериями.
2.2. Каждая серия мясо-пептонного бульона на предприятиях биологической промышленности Министерства сельского хозяйства СССР должна быть принята государственным контролером Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.
2.3. Под серией следует понимать любое количество мясо-пептонного бульона, изготовленное за один технологический цикл, в одной емкости (реакторе) и оформленное одним документом о качестве.
2.4. Для проверки качества препарата от каждой серии мясо-пептонного бульона более 50 л отбирают 2 л, при объеме менее 50 л - 0,6 л.
Если вся серия мясо-пептонного бульона расфасована в бутыли, делают выборку в количестве одной бутыли. Если мясо-пептонный бульон расфасован во флаконы, составляют выборку такого количества флаконов, чтобы объем мясо-пептонного бульона в отобранных флаконах соответствовал указанной выше норме, которая установлена в зависимости от общего объема серии мясо-пептонного бульона.
2.5. При получении неудовлетворительных результатов испытаний хотя бы по одному из показателей серию мясо-пептонного бульона считают не соответствующей требованиям настоящего стандарта.
2.6. Контрольную проверку образцов по требованию потребителя проводит Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.
3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ
3.1. Методы отбора проб
3.1.1. Пробу мясо-пептонного бульона в количестве 2 или 0,6 л (в зависимости от объема серии препарата) отбирают из реактора или бутыли стерильно.
Пробу объемом 2 л расфасовывают в 10 флаконов по 200 см. Пять флаконов используют для анализа, а пять - оставляют в архиве государственного контролера.
Пробу, отобранную от серии мясо-пептонного бульона объемом менее 50 л, в архиве не оставляют.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.2. Внешний вид, цвет, наличие механической примеси, плесени, хлопьев и осадка устанавливают, просматривая флаконы и бутыли с мясо-пептонным бульоном в проходящем свете, для чего флаконы встряхивают, переворачивая вниз пробками, а бутыли покачивают.
3.3. Запах мясо-пептонного бульона определяют в пробе органолептически.
3.4. Определение содержания общего азота
3.4.1. Аппаратура и реактивы
Для проведения испытания применяют:
весы аналитические;
колбу Кьельдаля вместимостью 50-100 см по ГОСТ 25336-82;
аппарат микро-Кьельдаль;
элемент нагрева (плитку, горелку);
пипетки на 1, 2, 5 см по ГОСТ 20292-74;
бюретки по ГОСТ 20292-74;
воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72;
кислоту серную по ГОСТ 4204-77, концентрированную и 0,1 н раствор;
натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-77, 30-33%-ный и 0,1 н растворы, приготовленные на предварительно прокипяченной дистиллированной воде;
перекись водорода по ГОСТ 10929-76;
метиловый красный;
метиленовую синь;
спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962-67;
метиловый оранжевый, 0,1%-ный раствор.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.4.2. Проведение испытания
Мясо-пептонный бульон в количестве 1 см помещают в колбу Кьельдаля и прибавляют 2 см концентрированной серной кислоты. В горло колбы вставляют стеклянный грушевидный баллончик или небольшую воронку с запаянным кончиком и минерализуют пробу сначала на слабом огне, затем степень нагрева усиливают, не допуская выбрасывания кипящей смеси в узкую часть колбы. Минерализацию проводят в присутствии катализатора - перекиси водорода. Катализатор добавляют после начала кипения по 0,5 см через каждые 15-20 мин до полного обесцвечивания раствора.
После охлаждения содержимое колбы переносят в колбу для отгона, добавляя 10-12 см дистиллированной воды. Полноту переноса проверяют по индикатору метиловому оранжевому. Последняя порция смывных вод должна остаться желтой.
В приемную колбу аппарата Кьельдаля наливают 20 см 0,1 н раствора серной кислоты и 2 капли индикатора Таширо. Индикатор Таширо готовят, растворяя 0,4 г метилового красного и 0,2 г метиленовой сини в 200 см 96%-ного этилового спирта.
Отгонную колбу присоединяют к холодильнику и парообразователю. Содержимое отгонной колбы нейтрализуют 30-33%-ным раствором гидрата окиси натрия по индикатору метиловому оранжевому. Отгон производят до тех пор, пока в приемной колбе соберется около 70 см раствора.
Содержимое приемной колбы титруют 0,1 н раствором гидрата окиси натрия до перехода окраски раствора от лилового к зеленому.
Одновременно ставят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо мясо-пептонного бульона в колбу для минерализации берут 1 см дистиллированной воды.
3.4.3. Обработка результатов
Содержание общего азота в мясо-пептонном бульоне () в процентах вычисляют по формуле
,
где - количество 0,1 н раствора серной кислоты, налитое в приемную колбу, см;
- поправочный коэффициент к титру 0,1 н серной кислоты;
- количество 0,1 н раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование испытуемой пробы, или в контрольном опыте, см;
- поправочный коэффициент к титру 0,1 н раствора гидрата окиси натрия;
- количество мясо-пептонного бульона, взятое на анализ, см;
0,0014 - количество азота, соответствующее 1 см 0,1 н раствора серной кислоты, г.
За окончательный результат испытания принимают разность между средними арифметическими двух параллельных определений в опытных и контрольных пробах. Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений не должны превышать ±0,5%.
3.4.2, 3.4.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).
3.5. Определение содержания азота аминогрупп аминокислот и низших пептидов
3.5.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Для проведения испытания применяют:
рН-метр;
стаканы лабораторные по ГОСТ 25336-82;
пипетки, бюретки по ГОСТ 20292-74;
формалин технический по ГОСТ 1625-75;
натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-77, 0,1 н раствор;
фенолфталеин, 1%-ный спиртовой раствор;
воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.5.2. Подготовка к испытанию
Непосредственно перед проведением анализа готовят формольную смесь. Для этого к 50 см формалина добавляют 1 см 1%-ного раствора фенолфталеина и 0,1 н раствором гидрата окиси натрия доводят смесь до слаборозового цвета.
3.5.3. Проведение испытания
К 2 см мясо-пептонного бульона приливают 18 см дистиллированной воды и доводят 0,1 н раствором гидрата окиси натрия рН смеси до 7,0. Затем приливают 2 см формольной смеси и при постоянном перемешивании потенциометрически титруют 0,1 н раствором гидрата окиси натрия до рН 9,2.
Одновременно ставят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо 2 см мясо-пептонного бульона берут 2 см дистиллированной воды.
3.5.4. Обработка результатов
Содержание азота аминогрупп аминокислот и низших пептидов в мясо-пептонном бульоне () в процентах вычисляют по формуле
,
где - количество 0,1 н раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование испытуемой пробы, см;
- количество 0,1 н раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование в контрольном опыте, см;
- поправочный коэффициент к титру 0,1 н раствора гидрата окиси натрия;
0,0014 - количество азота, соответствующее 1 см 0,1 н раствора гидрата окиси натрия, г;
2 - количество мясо-пептонного бульона, взятое на анализ, см.
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±0,2%.
3.5.2-3.5.4. (Измененная редакция, Изм. N 1).
3.6. Определение содержания пептонов
3.6.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Для проведения испытания применяют:
фотоэлектроколориметр или спектрофотометр;
пипетки по ГОСТ 20292-74;
пробирки по ГОСТ 25336-82;
натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-77, 10%-ный раствор;
медь сернокислую по ГОСТ 4165-78, 2%-ный раствор;
воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72;
центрифуги настольные типа ОПН-8-14,2.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.6.2. Подготовка к испытанию
3.6.2.1. При построении градуировочного графика по оси абсцисс откладывают концентрацию истинного пептона в процентах, по оси ординат - оптическую плотность () согласно данным, приведенным в табл.2.
Таблица 2
Концентрация истинного пептона, % | Оптическая плотность, |
0,50 | 0,550 |
0,25 | 0,280 |
0,17 | 0,190 |
3.6.3. Проведение испытания
В пробирку наливают 10 см мясо-пептонного бульона в разведении 1:10, прибавляют по 1 см 10%-ного раствора гидрата окиси натрия и 2%-ного раствора сернокислой меди. Смесь после добавления каждого реактива хорошо встряхивают.
Одновременно проводят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо 10 см разведенного мясо-пептонного бульона берут 10 см дистиллированной воды.
Через 2 мин смесь центрифугируют 10 мин с частотой вращения 3000-4000. Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волн 540-560 нм или спектрофотометре при 540 нм в кюветах с рабочей длиной 10 мм.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.6.4. Обработка результатов
Концентрацию истинного пептона в мясо-пептонном бульоне определяют по градуировочному графику.
Оптическая плотность () мясо-пептонного бульона равна разности оптических плотностей в опыте с испытуемой пробой и в контрольном опыте. Полученную по графику концентрацию истинного пептона умножают на 10 (т.е. на разведение мясо-пептонного бульона).
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±5%.
3.7. Определение содержания сухого вещества
3.7.1. Аппаратура
Для проведения испытания применяют:
весы аналитические;
шкаф сушильный лабораторный;
эксикаторы по ГОСТ 25336-82;
стаканчики для взвешивания (бюксы) по ГОСТ 25336-82;
пипетки по ГОСТ 20292-74.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.7.2. Проведение испытания
В предварительно высушенную до постоянной массы бюксу взвешивают с погрешностью не более 0,0002 г мясо-пептонный бульон в количестве 1,0-1,2 г. Затем бюксу с мясо-пептонным бульоном высушивают в сушильном шкафу при температуре 100-105 °С до постоянной массы. Высушивание продолжают до тех пор, пока разность между двумя последующими взвешиваниями будет не более 0,0002 г.
Примечание. Увеличение массы при одном из взвешиваний в процессе высушивания при расчете не учитывают.
3.7.3. Обработка результатов
Содержание сухого вещества в мясо-пептонном бульоне () в процентах вычисляют по формуле
,
где - масса пустой бюксы с крышкой, г;
- масса бюксы с крышкой и с мясо-пептонным бульоном до высушивания, г;
- масса бюксы с крышкой и с мясо-пептонным бульоном после высушивания, г;
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать 0,2%.
3.8. Определение содержания бeлка (по методу Лоури)
3.8.1. Аппаратура и реактивы
Для проведения испытания применяют:
фотоэлектроколориметр;
пробирки стеклянные по ГОСТ 25336-82;
пипетки по ГОСТ 20292-74;
фильтры бумажные;
натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-77, 0,1 н. раствор;
натрий углекислый по ГОСТ 84-76;
натрий виннокислый или калий виннокислый двузамещенный, 1%-ный раствор;
медь сернокислую по ГОСТ 4165-78;
натрий вольфрамовокислый по ГОСТ 18289-78;
натрий молибденовокислый по ГОСТ 10931-74;
кислоту ортофосфорную 85%-ную;
кислоту соляную по ГОСТ 3118-67*;
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 3118-77. - .
литий сернокислый;
бром по ГОСТ 4109-79;
воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.8.2. Подготовка к испытанию
Приготовление реактива А
Навеску углекислого натрия массой 2 г, взвешенную с погрешностью не более 0,02 г, растворяют в 100 см 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия. Если раствор мутный, то перед определением его надо профильтровать.
Приготовление реактива В
Навеску сернокислой меди массой 0,5 г, взвешенную с погрешностью не более 0,02 г, растворяют в 100 см 1%-ного раствора двузамещенного виннокислого натрия или калия. Если раствор мутный, то перед определением его надо профильтровать.
Приготовление реактива С
Реактив С готовят непосредственно перед определением путем смешивания 50 частей реактива А и 1 части реактива В.
Приготовление реактива Д
Реактив Д (реактив Фолина) готовят в круглодонной на 1 л колбе из огнеупорного стекла с обратным холодильником.
В колбу помещают 100 г вольфрамовокислого натрия, 25 г молибденовокислого натрия и 700 см дистиллированной воды. После полного растворения солей в колбу добавляют 50 см 85%-ной ортофосфорной кислоты и 100 см концентрированной соляной кислоты. Содержимое колбы осторожно, но хорошо перемешивают. К колбе присоединяют обратный холодильник и смесь кипятят (не слишком сильно) в течение 10 ч. Кипячение можно вести с перерывом, но учитывают лишь период кипения.
После окончания кипячения в смесь добавляют 150 г сернокислого лития, 50 см дистиллированной воды и 5 капель брома (осторожно). Для удаления излишка брома раствор кипятят 15 мин без холодильника под тягой. После охлаждения готовый раствор доводят в мерной колбе до 1 л, фильтруют через бумажный фильтр и хранят в темной склянке с притертой пробкой в темном месте. Реактив Д должен быть соломенно-желтого цвета без зеленого оттенка, затем в реактиве определяют концентрацию кислоты. Для этого приготовленный реактив разводят дистиллированной водой 1:10 (1 см реактива и 9 см воды) и титруют 0,1 н раствором гидрата окиси натрия по фенолфталеину (3-4 капли). Кислотность рассчитывают делением количества миллилитров 0,1 н. щелочи, израсходованного на титрование 1 см реактива Д, на 10. Реактив Д имеет кислотность 1,6-2,3 Н.
Приготовление реактива Е
Реактив Е является реактивом Д, разведенным до 1 н. раствора. Например, если реактив Д является 2,3 н раствором кислоты, то для приготовления 1 н раствора Е надо брать 10 см реактива Д и 13 см дистиллированной воды.
Построение градуировочного графика для определения белка
Готовят ряд растворов с определенным содержанием белка нисходящей концентрации от 0,10 до 0,01%, с которыми ставят цветную реакцию по п.3.8.3. Для приготовления растворов можно использовать альбумин, миозин, нативную сыворотку. Содержание белка в растворах определяют по Кьельдалю. Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре против воды. Из оптической плотности растворов белка вычитают оптическую плотность контроля на реактивы и полученную величину откладывают по оси ординат. По оси абсцисс откладывают концентрацию белка в растворе (в процентах или в миллиграммах).
Разведение исследуемого образца для постановки цветной реакции выбирают такое, чтобы основное количество замеров по величине оптической плотности лежало в пределах 0,2-0,8, где точность измерения наиболее высокая.
3.8.3. Проведение испытания
В пробирку наливают 1 см разведенного 1:10 мясо-пептонного бульона, добавляют 5 см реактива С, перемешивают и через 10 мин добавляют 0,5 см реактива Е. Одновременно ставят контроль на реактивы, для чего вместо мясо-пептонного бульона берут 1 см дистиллированной воды и добавляют те же реактивы, что и в пробирку с мясо-пептонным бульоном. Смесь хорошо перемешивают и ставят в темное место на 30-40 мин.
Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре с красным фильтром (630-640 нм) против воды в 5-миллиметровых кюветах. Из величин оптической плотности испытуемого образца вычитают величину оптической плотности контроля на реактивы. По полученным значениям оптической плотности растворов с помощью градуировочного графика определяют содержание белка в пробах. При расчете содержания белка в пробе учитывают кратность разведения перед постановкой цветной реакции.
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±0,05%.
3.8.2, 3.8.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).
3.9. Определение содержания хлорида натрия
3.9.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Для проведения испытания применяют:
весы аналитические;
элемент нагрева (горелку, плитку);
пипетки по ГОСТ 20292-74;
бюретки по ГОСТ 20292-74;
стаканы лабораторные по ГОСТ 25336-82;
квасцы железоаммонийные по ГОСТ 4205-77, насыщенный раствор;
калий роданистый по ГОСТ 4139-75 или аммоний роданистый, 0,1 н раствор;
кислоту азотную по ГОСТ 4461-77, концентрированную;
серебро азотнокислое по ГОСТ 1277-75, 0,1 н раствор;
воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.9.2. Проведение испытания
2 см мясопептонного бульона помещают в стакан, добавляют 20 см воды, 1 см концентрированной азотной кислоты и 10 см 0,1 н. раствора азотнокислого серебра.
Полученную смесь нагревают до начала кипения и быстро охлаждают путем погружения стакана в сосуд с водой комнатной температуры. После охлаждения к смеси добавляют 2 см насыщенного раствора железоаммонийных квасцов и титруют 0,1 н раствором роданистого калия (или роданистого аммония) до появления желтовато-розового окрашивания.
3.9.3. Обработка результатов
Содержание хлорида натрия в мясо-пептонном бульоне () в процентах вычисляют по формуле
,
где - количество 0,1 н раствора азотнокислого серебра, взятое в стакан с пробой, см;
- поправочный коэффициент к титру 0,1 н раствора азотнокислого серебра;
- количество 0,1 н раствора роданистого калия (или роданистого аммония), израсходованное на титрование испытуемой пробы, см;
- поправочный коэффициент к титру 0,1 н раствора роданистого калия (или роданистого аммония);
0,005844 - количество хлорида натрия, соответствующее 1 см 0,1 н раствора азотнокислого серебра;
- количество мясо-пептонного бульона, взятое на анализ, см.
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±0,01%.
3.9.2, 3.9.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).
3.10. Определение концентрации водородных ионов (рН)
3.10.1. Аппаратура и материалы
Для проведения испытания применяют:
рН-метр;
стаканы лабораторные по ГОСТ 25336-82;
воронки стеклянные;
фильтры бумажные.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.10.2. Проведение испытания
Мясо-пептонный бульон фильтруют через бумажный фильтр и в прозрачном фильтрате определяют рН по инструкции, приложенной к рН-метру.
3.11. Определение стерильности
3.11.1. Аппаратура, материалы, реактивы
Для проведения испытания применяют:
термостат с температурой нагрева 37-38 °С;
автоклав;
флаконы вместимостью 200 см;
пипетки по ГОСТ 20292-74;
пробирки стеклянные по ГОСТ 25336-82;
воронки стеклянные;
пробки ватномарлевые;
фильтры бумажные;
пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805-76;
агар микробиологический по ГОСТ 17206-84*.
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 17206-96. Здесь и далее по тексту. - .
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.11.2. Подготовка к испытанию
Готовят в соответствии с действующей рецептурой, мясо-пептонный бульон (МПБ), мясо-пептонный агар (МПА) и мясо-пептонный печеночный бульон (МППБ) под маслом (среда Китт-Тароцци). Среды разливают по 8-10 см в пробирки, закрывают ватно-марлевыми пробками и пергаментными колпачками и стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин при 1,5 кгс/см.
3.11.3. Проведение испытания
Мясо-пептонный бульон (всю серию) в реакторе или в бутылях выдерживают в течение трех дней при комнатной температуре. Взятую стерильно пробу мясо-пептонного бульона расфасовывают по 100 см в четыре флакона вместимостью 200 см. Затем высевают мясо-пептонный бульон в пробирки с МПБ, МПА и МППБ. Посевы производят в 6-8 пробирок с каждой средой. Посев производят добавлением в каждую пробирку по 0,2 см испытываемого мясо-пептонного бульона. Пробирки и флаконы выдерживают в течение трех дней в термостате при температуре 37-38 °С. Среды в пробирках и мясо-пептонный бульон во флаконах должны оставаться стерильными.
3.11.2, 3.11.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).
3.11.4. Обработка результатов
При наличии роста микрофлоры в реакторе или бутылях серия мясо-пептонного бульона бракуется. При наличии роста микрофлоры во всех флаконах и пробирках серия мясо-пептонного бульона также бракуется.
При наличии роста микрофлоры в одном флаконе или в одной-двух пробирках контроль на стерильность повторяют на удвоенном количестве флаконов и пробирок. При повторном росте микрофлоры серию мясо-пептонного бульона бракуют.
3.12. Определение способности поддерживать рост микробов
3.12.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Для проведения испытания применяют:
весы технические;
термостат;
автоклав;
рН-метр;
пипетки по ГОСТ 20292-74;
бюретки по ГОСТ 20292-74;
пробирки стеклянные по ГОСТ 25336-82;
воронки стеклянные;
пробки ватномарлевые;
фильтры бумажные;
пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805-76;
агар микробиологический по ГОСТ 17206-84.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.12.2. Подготовка к испытанию
Готовят согласно действующей рецептуре на основе испытуемого мясо-пептонного бульона мясо-пептонный агар, добавляя к бульону 2% микробиологического агара, и устанавливают рН среды 7,4.
Испытуемый мясо-пептонный бульон и приготовленный мясо-пептонный агар разливают по 8-10 см в пробирки, закрывают ватномарлевыми пробками и пергаментными колпачками и стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин при 1,5 кгс/см.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.12.3. Проведение испытания
Стерильный мясо-пептонный бульон и мясо-пептонный агар засевают суточными культурами: Staphylococcus aureus "Лассманов", Esherichia coli, штамм 675, Streptococcus faccalis, штамм 6783, полученными из Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских препаратов им. Л.А.Тарасевича. Посев каждой культуры производят пастеровской петлей в три пробирки с МПБ и в три пробирки с МПА. Инкубацию проводят в течение 24 ч в термостате при 37-38 °С.
Рост культуры должен быть типичным и обильным.
3.12.4. Обработка результатов
Типичность роста суточных культур определяют визуально и под микроскопом.
Интенсивность роста на МПА оценивают визуально, в МПБ - визуально и на фотоэлектроколориметре при длине волны 620-640 нм в кюветах с рабочей длиной 5 мм.
4. УПАКОВКА, МАРКИРОВКА, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ*
______________
* Наименование раздела. Измененная редакция, Изм. N 1.
4.1. Мясо-пептонный бульон стерильно расфасовывают в стеклянные бутыли (баллоны) вместимостью 10±0,5 и 20±1 л. Допускается более мелкая расфасовка - флаконы вместимостью 200 и 500 см.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
4.2. Бутыли закрывают стерильными резиновыми пробками, которые сверху завязывают пергаментной бумагой. Флаконы закрывают резиновыми пробками и закатывают алюминиевыми колпачками.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
4.3. На бутыли и флаконы наклеивают бумажные этикетки с указанием:
наименования препарата;
количества препарата, л;
номера серии препарата;
даты изготовления;
срока годности;
условий хранения;
обозначения настоящего стандарта.
4.4. Мясо-пептонный бульон хранят в реакторе или в бутылях в чистом, сухом и темном помещении при температуре 4-10 °C.
4.5. Мясо-пептонный бульон транспортируют всеми видами транспорта при соблюдении условий хранения, указанных в п.4.4. Допускается транспортирование при более высокой температуре, но не выше 18 °С, при этом срок транспортирования должен быть не более пяти суток.
4.6. Срок годности мясо-пептонного бульона 6 месяцев со дня изготовления. По истечении указанного срока мясо-пептонный бульон подвергают испытанию и в случаях соответствия требованиям, установленным настоящим стандартом, срок годности может быть продлен еще на 3 месяца.
Замена
ГОСТ 1277-75 введен взамен ГОСТ 1277-63.
ГОСТ 4139-75 введен взамен ГОСТ 4139-65.
ГОСТ 6371-73 введен взамен ГОСТ 6371-64.
ГОСТ 10394-72 введен взамен ГОСТ 10394-63.
ГОСТ 10515-75 введен взамен ГОСТ 10515-63.
ГОСТ 10931-74 введен взамен ГОСТ 10931-64.
Электронный текст документа
и сверен по:
М.: Издательство стандартов, 1976