ГОСТ 23681-79
Группа Р31
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР
СПЕРМА ЖЕРЕБЦОВ НЕРАЗБАВЛЕННАЯ СВЕЖЕПОЛУЧЕННАЯ
Технические условия
Fresh non-diluted sperm of stallions. Specification
ОКП 989510
Cрок действия с 01.07.1980
до 01.07.1985*
_______________________________
* Ограничение срока действия снято
по протоколу N 4-93 Межгосударственного Совета
по стандартизации, метрологии и сертификации
(ИУС N 4, 1994 год). - .
РАЗРАБОТАН Министерством сельского хозяйства СССР
ИСПОЛНИТЕЛИ
Н.Г.Балашов, Г.А.Голикова, М.В.Косенко, А.И.Науменков, В.Н.Родина, Н.К.Романькова, Е.Л.Фомина, Н.Ф.Чуклов
ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР
Член Коллегии А.Д.Третьяков
УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 4 июня 1979 г. N 1997
Настоящий стандарт распространяется на свежеполученную неразбавленную сперму, взятую в искусственную вагину от жеребцов в возрасте 3 лет и старше и предназначенную для искусственного осеменения.
1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ
1.1. Свежеполученная неразбавленная сперма жеребцов должна быть сохранена не более 30 мин и соответствовать требованиям настоящего стандарта.
1.2. Сперму получают от здоровых жеребцов с оплодотворяющей способностью спермы не менее 55%.
Примечание. Допускается с разрешения Министерства сельского хозяйства СССР или министерства сельского хозяйства союзной республики получать сперму от высококлассных жеребцов или жеребцов с ценными в генетическом отношении признаками с оплодотворяющей способностью спермы менее 55%.
1.3. Свежеполученная неразбавленная сперма жеребцов по органолептическим, физическим, биологическим и морфологическим показателям должна соответствовать требованиям и нормам, указанным в табл.1.
Таблица 1
Наименование показателя | Характеристика и норма |
Внешний вид | Однородная жидкость светло-серого цвета, без хлопьев, крови и гноя |
Концентрация спермиев, млн/мл, не менее | 150 |
Подвижность спермиев, баллы, не менее | 5,0 |
Выживаемость спермиев при 2-5 °С при разбавлении спермы 1:3 лактозо-хелато-цитратно-желточной средой: | |
показатель абсолютной выживаемости (), не менее | 450 |
выживаемость, ч, не менее | 150 |
Количество спермиев с анормальной морфологией, %, не более | 20 |
1.4. Сперма, предназначенная для замораживания, должна иметь резистентность к холодовому шоку не ниже 0,1; коэффициент осмотической (физиологической) резистентности спермиев должен быть не ниже 1.
Резистентность к холодовому шоку и коэффициент осмотической (физиологической) резистентности спермиев определяют периодически не реже одного раза в квартал.
1.5. Сперма по ветеринарно-санитарному состоянию должна соответствовать требованиям и нормам, указанным в табл.2.
Таблица 2
Наименование показателя | Норма |
Общее количество бактерий в 1 мл, не более | 5000 |
Коли-титр, не более | 0,1 |
Патогенные и условно патогенные микроорганизмы | Не допускаются |
Концентрация водородных ионов (рН) при 19±1 °С | 7,3±0,4 |
Общее количество бактерий, коли-титр, патогенные и условно патогенные бактерии, концентрацию водородных ионов (рН) определяют предприятия искусственного осеменения периодически не реже одного раза в квартал в лабораториях государственной ветеринарной службы.
2. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ
2.1. Метод отбора проб
2.1.1. Отбор проб - по ГОСТ 20909.1-75.
2.2. Внешний вид, цвет, наличие или отсутствие хлопьев, крови, гноя определяют, осматривая сперму в мензурке в проходящем свете при периодическом встряхивании мензурки.
2.3. Концентрацию спермиев определяют в счетной камере по ГОСТ 20909.5-75 со следующим изменением: сперму разбавляют в 10 или 20 раз, набирая ее до отметки 0,5 или 1,0 и заполняя 3%-ным раствором хлористого натрия до отметки 11.
2.4. Определение подвижности спермиев - по ГОСТ 20909.4-75 со следующим изменением: раствор лимоннокислого натрия к капле спермы не добавляют.
2.5. Определение показателя абсолютной выживаемости () и выживаемости спермиев в часах - по ГОСТ 20909.4-75 со следующим изменением: сперму жеребцов разбавляют 1:3 лактозо-хелато-цитратно-желточной средой следующего состава:
вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72 - 100 мл;
лактоза - 11 г;
хелатон - 0,1 г;
натрия бикарбонат 4,2%-ный раствор - 0,2 мл;
натрия цитрат 35,7%-ный раствор - 0,25 мл;
желток куриного яйца - 1,6 г;
спермосан-3 по ГОСТ 22636-77 - 30000 ЕД.
2.6. Определение количества спермиев с анормальной морфологией - по ГОСТ 20909.3-75.
2.7. Определение резистентности спермиев к холодовому шоку
Сущность метода заключается в определении выживаемости спермиев после быстрого их охлаждения до температуры 1-3 °С.
2.7.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Для проведения испытания применяют:
микроскоп биологический марки МБИ или МБР по ГОСТ 8284-67;
термостат ТМ-1 для микроскопа;
стекла предметные по ГОСТ 9284-75;
стекла покровные размером 18х18 мм по ГОСТ 6672-75;
палочки стеклянные или пипетки пастеровские;
пробирки стеклянные вместимостью 1,5 мл и более;
штатив для пробирок;
глюкозу по ГОСТ 6038-74*, 7%-ный раствор.
______________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 6038-79, здесь и далее по тексту. - .
2.7.2. Подготовка к испытанию
Перед испытанием готовят на прокипяченной дистиллированной воде 7%-ный раствор глюкозы.
В чистые флаконы, подогретые до 30 °С, разливают по 1 мл спермы и добавляют по 3 мл 7%-ного раствора глюкозы, подогретого до 30 °С. Все перемешивают.
Готовят ванну со льдом с температурой 1-2 °С.
2.7.3. Проведение испытания
В пипетку набирают 0,5 мл спермы, разбавленной 7%-ным раствором глюкозы, и помещают в тонкостенные 1,5-миллилитровые стеклянные пробирки, из расчета на каждую пробу спермы не менее четырех пробирок.
Пробирки со спермой помещают в водяную баню при температуре 37 °С на 5 мин. Затем две пробирки с исследуемой спермой переносят в ванну с тающим льдом (температура 1-2 °С) и выдерживают 20 мин. Оставшиеся две пробирки выдерживают 20 мин при комнатной температуре.
Подвижность спермиев определяют под микроскопом по ГОСТ 20909.4-75 с изменением, указанным в п.2.4.
2.7.4. Обработка результатов
Резистентность спермиев к холодовому шоку () вычисляют по формуле
,
где - подвижность спермиев после холодового шока;
- подвижность спермиев в пробирках, выдержанных 5 мин при 37 °С и 20 мин при комнатной температуре.
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемое расхождение между результатами параллельных определений не должно превышать ±10%.
Пример. Подвижность спермиев в пробирках, выдержанных 5 мин при 37 °С и 20 мин при комнатной температуре, - 6,0 баллов, а спермиев в пробирках, подвергнутых холодовому шоку, - 1,0 балл.
Следовательно, резистентность к холодовому шоку равна
.
2.8. Определение коэффициента осмотической (физиологической) резистентности спермиев
Для определения коэффициента осмотической (физиологической) резистентности спермиев устанавливают осмотическую (физиологическую) резистентность, а затем вычисляют коэффициент осмотической (физиологической) резистентности.
2.8.1. Определение осмотической (физиологической) резистентности спермиев
Сущность метода заключается в определении устойчивости спермиев к действию гипотонического раствора глюкозы.
2.8.1.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Для проведения испытания применяют:
микроскоп биологический марки МБИ или МБР по ГОСТ 8284-67;
термостат ТМ-1 для микроскопа;
флаконы вместимостью 10-15 мл;
микропипетки стеклянные;
колбы стеклянные вместимостью 100 мл по ГОСТ 1770-74;
стекла предметные по ГОСТ 9284-75;
стекла покровные по ГОСТ 6672-75;
глюкозу по ГОСТ 6038-74, 3, 4, 5 и 6%-ный растворы;
воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.
2.8.1.2. Подготовка к испытанию
При определении осмотической резистентности свежеполученной неразбавленной спермы должны строго соблюдаться правила, предупреждающие холодовый шок спермиев. Растворы и лабораторная посуда, применяемые для проведения испытания, должны быть чистыми и подогретыми до 30-35 °С.
Берут по два пенициллиновых флакона с раствором глюкозы каждой из концентрации глюкозы. Глюкозу разливают по 2 мл в каждый флакон. Флаконы закрывают резиновыми пробками и ставят в термостат при температуре 30-35 °С на 10-15 мин.
2.8.1.3. Проведение испытания
В каждый флакон с раствором глюкозы вносят по 0,2 мл испытуемой спермы. Получают разбавление 1:10. Пробирки с разбавленной спермой выдерживают 20 мин при комнатной температуре 18-22 °С.
Подвижность спермиев в разбавленной капле определяют по ГОСТ 20909.4-75 с изменением, указанным в п.2.4.
2.8.1.4. Обработка результатов
Осмотическую резистентность спермиев () выражают значением концентрации раствора глюкозы, при которой подвижность спермиев составляет не менее 0,5 балла. Чем ниже концентрация раствора глюкозы, в которой спермин остаются живыми, тем выше осмотическая резистентность спермиев.
Пример. В пробирке 4 (3%-ный раствор глюкозы) определена единичная подвижность спермиев, а в пробирке 3 (4%-ный раствор глюкозы) подвижность спермиев 0,5 балла. Следовательно, значение осмотической резистентности спермиев равно 4. Или, если в пробирке 4 мертвые спермии, в пробирке 3 - единичная подвижность спермиев, а в пробирке 2 (5%-ный раствор глюкозы) - подвижность 0,5 балла, то осмотическая резистентность спермиев равна 5,0.
2.8.2. Коэффициент осмотической (физиологической) резистентности () вычисляют по формуле
,
где - постоянный коэффициент;
- осмотическая резистентность (концентрация раствора глюкозы, %).
2.9. Определение общего количества бактерий - по ГОСТ 20909.2-75.
2.10. Определение коли-титра спермы - по ГОСТ 20909.2-75.
2.11. Патогенные и условно патогенные микроорганизмы устанавливают по гемолитическим свойствам, плазмокоагуляции и способности убивать белых мышей при подкожном или внутрибрюшинном введении культуры. При проявлении одного из указанных признаков микроорганизмы считают патогенными.
2.12. Определение концентрации водородных ионов (рН) спермы - по ГОСТ 20909.5-75.
Электронный текст документа
и сверен по:
М.: Издательство стандартов, 1979